關(guān)于泰樂菌素
美洲幼蟲腐臭病,簡稱美幼病,英文縮寫AFB,是一種蜜蜂傳染性疾病,由類幼蟲芽孢桿菌(最初定名為幼蟲芽孢桿菌)引起,這種病菌屬革蘭氏陽性的產(chǎn)芽孢厭氧菌。感染此病的蜜蜂個體在幼蟲和蛹階段,先變黃,再變黑直至腐爛,產(chǎn)生大量粘性物質(zhì)殘留在蜂巢內(nèi)壁上,造成污染。美幼病是為數(shù)不多的能夠毀滅整群蜂的嚴(yán)重病害之一,加之病原菌孢子壽命長,預(yù)防和控制美幼病非常困難。從20世紀(jì)50年代開始,在美國防治這種病害的唯一方法是使用一種叫“土霉素”的抗生素(簡稱OTC,一種四環(huán)素類抗生素),當(dāng)時這種藥品的商品名為“土霉素”。土霉素在溶液中很容易分解,因此有人認(rèn)為這種藥可能不會污染蜂蜜。
最近,美國的很多蜂農(nóng)發(fā)現(xiàn)用土霉素防治美幼病的效果越來越差。Miyagi等研究證明,從患有美幼病的幼蟲體內(nèi)提取的類芽抱桿菌的幼蟲出現(xiàn)了抗土霉素的變種,試驗所用子脾是1998年從明尼蘇達州的蜂群抽取的,土霉素對抽樣蜂群的治療效果很差。
為了應(yīng)對不斷發(fā)生的類芽抱桿菌藥物抗性事件,多年來美國農(nóng)業(yè)部已經(jīng)對可選用的抗生素進行仔細(xì)篩選。1970年,泰樂菌素首次被報道作為治療美幼病的候選藥物。Moffett等發(fā)現(xiàn)在蔗糖糖漿中摻入少量泰樂菌素飼喂感染美幼病的蜂群,32天內(nèi)患病蜂群康復(fù),對感病蜂群進行l(wèi)周2次的治療(共進行12次),到次年7月所試蜂群未復(fù)發(fā)。用乳酸泰樂菌素治療患病蜂群,可采用兩種飼喂方法:加入糖水中飼喂蜂群和加在煉糖飼喂。采用上述方法對感病蜂群每周治療1次,至少3周,大部分美幼病群得到控制??傮w來說,直接飼喂要比噴灑效果更好。對于患病嚴(yán)重的蜂群康復(fù)之后,應(yīng)再堅持使用,按每群1 g乳酸泰樂菌素的劑量至少使用3周(每周1次)。按照以上劑量治療患病蜂群,25群只有2群在秋季再次出現(xiàn)輕微感染,可能是由于治療時間少于3周的緣故。Hitchcock 等又進行補充試驗,對患病蜂群施以更小劑量的酒石酸泰樂菌素,即治療一次所用的泰樂菌素量為每群0.25 g或0.1 g,縮短治療間隔時間,大約每3天1次,大約7周,結(jié)果對美幼病的療效達到100%。
泰樂菌素對成年蜂無毒副作用,對蜜蜂幼蟲的毒性也小于土霉素。通過在實驗室中對未成年工蜂進行藥效試驗,證實蜜蜂幼蟲耐藥性很大,所能忍耐食物中抗生素的劑量為0.005%~0.04%。實驗室研究表明食物中摻人的孢子達到一個非正常量(每毫升含1.5×108個孢子),中度劑量的泰樂菌素就可以防止蜜蜂小幼蟲感染類芽孢桿菌。在治療過程中增加抗生素的劑量,雖然對幼蟲和蛹的發(fā)育影響不大,但不能達到致死濃度(>0.05%)。煉糖中泰樂菌素更易被采集蜂取食,最高可達800 mg/7g 糖。當(dāng)分別用20 mg,100 mg,200 mg,400 mg和800 mg的濃度進行試驗時,未發(fā)現(xiàn)對蜂群產(chǎn)生負(fù)面影響,其中一定劑量范圍的泰樂菌素對美幼病的治療效果與標(biāo)準(zhǔn)劑量的四環(huán)素(200 mg)相當(dāng)。200 mg的四環(huán)素或100 mg的泰樂菌素均能預(yù)防美幼病,最長達3周,而200 mg的泰樂菌素則可達到4周。100 mg以上劑量的泰樂菌素完全可以治療感染美幼病的蜂群。野外實驗結(jié)果得出,每群蜂飼喂200 mg泰樂菌素可以預(yù)防蜂群感染美幼病達4周之久,再次飼喂同樣劑量的泰樂菌素可預(yù)防美幼病的時間更長,并且受蜂群和季節(jié)因素的影響,泰樂菌素有效控制時間要比四環(huán)素長33%。
泰樂菌素可以有效的控制AFB病菌對土霉素的抗性問題,而不會引起成年蜂和幼蟲的死亡。Elzen等發(fā)現(xiàn)在美幼病的最初治療階段,每周飼喂1次20 g精制細(xì)砂糖中添加200 mg泰樂菌素(最佳比例)劑量,飼喂3周,45天內(nèi)蜂群的癥狀明顯減輕,治愈后蜂群6個月未發(fā)現(xiàn)再次感染。而且用多種高劑量的泰樂菌素(20 g精制細(xì)砂糖中添加600 mg或1000 mg泰樂菌素)持續(xù)飼喂蜂群3個繁殖周期,與對照組相比沒有出現(xiàn)死亡率明顯升高的現(xiàn)象。試驗采用另一種治療方法進行驗證,即利用混有泰樂菌素的煉糖拌人植物油制成小餅飼喂,泰樂菌素的劑量與前種方法相同,這種方法同樣可以有效地控制美幼病的癥狀,但是蜂巢小甲蟲(Aethina tumida MuDay)的數(shù)量明顯增加。由于蜂巢小甲蟲對蜂群具有破壞性,這種方法沒有得到權(quán)威機構(gòu)的認(rèn)可。所以還是在白砂糖中直接添加泰樂菌素的方法更為可取。
A1ippi 等對采自不同地區(qū)的67個類芽抱桿菌樣品進行泰樂菌素的敏感性測定,確定了它們的最小抑菌濃度(MIC,在培養(yǎng)狀態(tài)下,抗生素能夠抑制細(xì)菌生長的最低濃度)。MIC值范圍是0.0078~0.5 μg/mL,這是所有AFB病原菌的分離菌均不能對泰樂菌素產(chǎn)生抗性的最低值。
補充試驗對100 mg和200 mg劑量的泰樂菌素進行了評價,證實泰樂菌素實際用量與糖的最適比例。將泰樂菌素加入到20g精制細(xì)砂糖中,每隔7天飼喂蜂群1次,共飼喂3次。結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)過45天,200 mg劑量組控制了抗性,而l00 mg劑量組未完全控制抗性。100 mg劑量組的10群蜂中有1群出現(xiàn)癥狀。所以,200 mg泰樂菌素每隔7天飼喂1次,共飼喂3次為最適劑量。
Kockansky 等對溶解于蔗糖糖漿中的泰樂菌素和土霉素的穩(wěn)定性進行了比較,發(fā)現(xiàn)在34℃黑暗條件下,溶于高純蔗糖糖漿中的土霉素的半衰期為7天(半衰期為物質(zhì)降解50%所用的時間);而泰樂菌素的穩(wěn)定性明顯較高,其半衰期為186天。泰樂菌素復(fù)合物(泰樂菌素和其降解產(chǎn)物混在一起)的半衰期則更長,達到287天。溶于商品化蔗糖糖漿中的抗生素相對較低,土霉素的半衰期為6.3天,泰樂菌素的半衰期為75天。這些抗生素溶于高純化和商品化的蔗糖糖漿中所表現(xiàn)出來的穩(wěn)定性差異可能是金屬離子污染的緣故,例如鐵和銅離子可以顯著催化生物材料發(fā)生氧化反應(yīng)。
泰樂菌素和蜂蜜混合經(jīng)長時間放置后,測定其中泰樂菌素殘留物的穩(wěn)定性。利用液體層析法分析,從稀釋的蜂蜜中提取殘留物。發(fā)現(xiàn)泰樂菌素經(jīng)長時間放置之后轉(zhuǎn)化為脫碳酶糖泰樂菌素(desmycosin),其半衰期在34℃時大約4個月。
蜂蜜中的脫碳酶糖泰樂菌素似乎更加穩(wěn)定,并且這兩種抗生素的總量在9個月后并未明顯減少。因此,利用泰樂菌素治療美幼病時要謹(jǐn)慎,以免其殘留物持續(xù)污染蜂蜜。
AFB病原菌對土霉素的抗性不斷發(fā)生,說明大量使用抗生素會降低其使用周期,在使用泰樂菌素過程中也應(yīng)考慮以上情況。多年來,特拉霉素作為一種預(yù)防美洲幼蟲腐臭病的藥物,而不是作為治療性的藥物。
2005年10月在美國,泰樂菌素(實際上為酒石酸泰樂菌素)被推薦用于預(yù)防蜂群美洲幼蟲病,但它還不能作為一種治療性的方法。其主要的使用方法如下:將200 mg酒石酸泰樂菌素混入20 g糖粉中,立即撒在于脾上部邊框上緣,每周治療1次,連續(xù)3周。
彭文君 譯自《蜜蜂集錦》2008年第11期
《中國蜂業(yè)》2009,59(3)
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